多疣壁虎(Gekko japonicus)隶属于爬行纲有鳞目壁虎科壁虎属,其生活史距今已有一亿多年。漫长的生存与进化史,独特而富有研究价值的性状(解毒、再生性、体温调节),使得多疣壁虎被国家林业局列为《国家保护的有益的或者有重要经济、科学研究价值的陆生野生动物名录》。
近日,南京师范大学李鹏教授团队在Cell子刊iScience上发表了题为“Insights into the adaptive evolution of chromosome and essential traits through chromosome-level genome assembly of Gekko japonicus”的研究论文。该研究通过PacBio和Hi-C测序构建了高质量的多疣壁虎基因组,随后结合多组学分析系统解析了多疣壁虎的染色体进化和独特表型(苦味感知、解毒、表皮形成、体温调节等)的形成与适应机制,从而为多疣壁虎的适应性进化与保护研究提供了新见解。5848vip威尼斯电子游戏承担了本研究中的测序与分析工作。
图1 文章发表信息
研究结果
1.多疣壁虎基因组的组装与注释
通过PacBio和Hi-C测序,研究者构建了高质量的多疣壁虎基因组,其基因组大小为2.54Gb,Contig N50=2.04Mb,并将基因组序列锚定到19条染色体上,BUSCO评估基因组完整性为93.8%。结合多种方法进行注释,研究者在多疣壁虎基因组中预测得到20503个蛋白编码基因,其重复序列与转座子元件占比分别为69.4%和65.87%。相比于之前已发表的多疣壁虎基因组,本研究构建的参考基因组连续性更好、准确性更高、注释更完整。
表1 不同版本多疣壁虎基因组组装结果的比较
2.多疣壁虎的染色体进化
研究者选择Anolis carolinensis 和Gallus gallus,通过与多疣壁虎进行共线性分析来确定其染色体的进化。多疣壁虎的大部分染色体都与Anolis carolinensis的一条染色体有较强共线性,说明其祖先发生了染色体分裂和融合事件;而多疣壁虎与Gallus gallus的比较则证实了蜥蜴类染色体进化的多样性和复杂性。
多疣壁虎染色体上大约7.54%的部分与Anolis carolinensis 和Gallus gallus存在EBRs(演化断点区域)和HSBs事件,且不同EBRs间的长度差异较大。与基因组其他区域相比,发生EBRs事件的区域具有更高的基因密度和较低的重复序列含量,但其GC含量没有增加。对EBRs区域涉及的基因富集分析表明,这些基因主要富集在防御反应途径中,这些免疫相关基因可能参与多疣壁虎的尾部再生、损伤修复和防御攻击。
图2 多疣壁虎与近缘种的共线性分析
3.多疣壁虎的比较基因组分析
通过与其它近缘种其外群共计22个基因组间的比较分析,研究者发现多疣壁虎与其它爬行亚纲的分化时间大概在191.9个百万年前,这与化石及之前结果相一致。通过对多疣壁虎中特有基因、扩张基因和正选择基因进行功能富集分析发现,一些富集的途径与嗅觉和味觉等感官和神经系统有关,这些途径可能参与捕食、进食和逃离天敌等活动。这表明,它们的相关基因可能在多疣壁虎汇中经历了适应性进化。其他一些途径是免疫相关的,如与T细胞、Nod样和TNF相关的途径,它们在免疫调节和炎症反应中发挥重要作用,可能是损伤修复、尾部再生和防御病理性疾病所必需的。
图3 多疣壁虎的比较基因组分析
4.多疣壁虎特殊表型适应性解析
多疣壁虎具有众多的特殊表型,例如苦味感知、解毒、表皮形成、体温调节等,这与其环境适应性息息相关。本研究对多疣壁虎的上述特殊表型进行了深入解析,具体结果如下。
(1)在苦味感知基因中,研究者鉴定了味觉受体2型(T2R)家族,并对其进化选择压力进行了多模型的测试。结果表明,多疣壁虎和其它七种有鳞目之间的进化压力模式总体上是一致的。具体而言,细胞外区和跨膜区明显比细胞内区域更不受纯化选择的约束,尤其是细胞外区域,它具有非常高的物种间和物种内变异水平,这表明它在适应性进化中的重要性。
图4 不同区域内T2R基因的选择压力测试
(2)研究者对多疣壁虎解毒基因CYPs进行了鉴定和分类,有鳞目中的CYPs与人类中的大多数不同源。D型CYPs基因具有高度不稳定性,有频繁的重复和丢失事件,表明它们比B型CYP基因经历了更多的出生和死亡过程。总之,研究者揭示了选择压力和出生-死亡过程之间相互作用的复杂性。
(3)研究者对多疣壁虎表皮形成相关的关键基因家族CBPs的系统发育、结构组成和同源性进行研究,结果表明多疣壁虎CBP蛋白都是具有短序列长度和小分子量的小蛋白,CBP基因家族可能在每个分支中都有特定的进化,且在进化中多疣壁虎的CBP与蜥蜴的更加相似。
(4)瞬时受体电位(TRP)通道由多种离子通道组成,在细胞内钙的调节中发挥重要作用。研究者对多疣壁虎的TRP基因进行了鉴定,结果表明TRP基因高度保守,且其TRP家族均只有一个拷贝。
图5 多疣壁虎的TRP基因鉴定与分类
总结
本研究中,研究者构建了一个高质量、准确性更好的多疣壁虎基因组,并对其进行了全面的比较基因组学和进化基因组学分析。基于高质量的基因组,研究者系统解析了多疣壁虎EBRs的区域特征和进化贡献,阐述了T2Rs和CYP基因组家族在多疣壁虎解毒机制中的关键作用,证实了CBPs在表皮发育、TRPs在温度感知中的可能作用。总之,本研究为多疣壁虎的适应性进化与保护研究提供了新见解。